Analyse des neurotransmetteurs urinaires par LC MS-MS : Guide pratique pour les scientifiques et chercheurs

L'analyse urinaire des neurotransmetteurs par LC MS-MS est une technique analytique puissante utilisée pour étudier le fonctionnement du cerveau. Elle permet de mesurer les concentrations de neurotransmetteurs, des molécules chimiques qui transmettent des signaux entre les neurones et influencent des fonctions cruciales comme l'humeur, le sommeil, la cognition et la douleur. Ce blog présente un aperçu simple et factuel de cette technique, en expliquant les neurotransmetteurs, le principe de la LC MS-MS et ses applications.

Neurotransmetteurs : Les messagers du cerveau

Les neurotransmetteurs sont des molécules chimiques synthétisées dans les neurones et libérées dans les synapses, les espaces minuscules qui séparent les neurones. Une fois libérés, ils se lient à des récepteurs spécifiques sur la membrane postsynaptique de la cellule cible, déclenchant une réponse cellulaire. Les principaux neurotransmetteurs incluent :

  • Dopamine: Impliquée dans la motivation, le plaisir, la récompense et le mouvement.
  • Sérotonine: Régule l'humeur, le sommeil, l'appétit et la digestion.
  • Noradrénaline: Joue un rôle dans la réponse au stress, la vigilance et l'attention.
  • GABA (acide gamma-aminobutyrique): Neurotransmetteur inhibiteur principal du système nerveux central, favorisant la relaxation et le sommeil.
  • Glutamate: Neurotransmetteur excitateur le plus abondant dans le cerveau, impliqué dans l'apprentissage, la mémoire et la perception.

Un déséquilibre des niveaux de neurotransmetteurs peut contribuer à des pathologies comme la dépression, l'anxiété, les troubles du mouvement et les maladies neurodégénératives.

Regions of the brain where neurotransmitters are mainly produced.

Analyse des neurotransmetteurs par LC MS-MS : Une technique puissante

La spectrométrie de masse en tandem par couplage liquide-chromatographie (LC MS-MS) est une technique analytique puissante et sensible utilisée pour quantifier les neurotransmetteurs et leurs métabolites dans l'urine. Elle offre plusieurs avantages :

  • Haute sensibilité: Détecte des concentrations infimes de neurotransmetteurs.
  • Spécificité: Identifie précisément les neurotransmetteurs et leurs métabolites.
  • Analyse simultanée: Mesure plusieurs neurotransmetteurs dans un seul échantillon d'urine.
  • Sensibilité: Analyse de petits volumes d'échantillon, important pour les populations pédiatriques ou gériatriques.

Fonctionnement de la LC MS-MS

L'analyse des neurotransmetteurs par LC MS-MS implique plusieurs étapes :

  1. Préparation de l'échantillon: Centrifugation et filtration de l'urine pour éliminer les débris cellulaires et les protéines.
  2. Séparation par chromatographie liquide: Séparation des neurotransmetteurs et de leurs métabolites en fonction de leurs propriétés physico-chimiques.
  3. Ionisation par électrospray: Transformation des composés séparés en ions chargés.
  4. Spectrométrie de masse en tandem: Analyse des ions générés en fonction de leur rapport masse/charge (m/z) et fragmentation dans une cellule de collision.
  5. Identification et quantification: Comparaison des spectres obtenus aux spectres de référence pour identifier et quantifier les composés présents dans l'échantillon d'urine.

An efficient chemical extraction and LC–MS/MS workflow for urinary peptidomic analysis Urine sample volumes are first normalized based on creatinine measurement. To prevent the formation of intra- or intermolecular disulfide bonds that would confound downstream data analysis, cysteine (Cys) residues are reduced with dithiothreitol (DTT) and alkylated with iodoacetamide (IAM). Proteins are depleted using a centrifugal filtration device with a molecular weight cutoff (MWCO) of 10 kDa under acidic denaturing conditions. The filtrate is processed using a mixed cation exchange solid-phase extraction column to remove metabolites and salts that interfere with LC–MS/MS analysis. After extensive washing, peptides are eluted from the column with methanol containing 5% ammonium hydroxide. Eluted peptides are dried in a centrifugal vacuum concentrator and reconstituted in water. Peptides are separated by nano-liquid chromatography (LC) on a reversed-phase column (RP-C18) and analyzed by tandem mass spectrometry (MS/MS) on an Orbitrap Fusion Lumos mass spectrometer operated in the data-dependent acquisition (DDA) mode, with precursor and fragment ions analyzed in high resolution in the Orbitrap (OT). The resulting LC–MS/MS data are searched against the desired databases (e.g., the human and wheat proteomes). The experimental workflow takes ~6 h to complete and results in the identification of thousands of peptides.

Applications de l'analyse des neurotransmetteurs par LCMS-MS

L'analyse des neurotransmetteurs par LC MS-MS trouve son application dans divers domaines :

  • Recherche en neurosciences: Étude du rôle des neurotransmetteurs dans le fonctionnement normal et pathologique du cerveau.
  • Diagnostic clinique: Aide au diagnostic de troubles neurologiques et psychiatriques, tels que la dépression, l'anxiété, les troubles du mouvement et les maladies neurodégénératives.
  • Suivi thérapeutique: Évaluation de l'efficacité des traitements pour les troubles neurologiques et psychiatriques.
  • Médecine légale: L'analyse des neurotransmetteurs par LC MS-MS peut également être utilisée en médecine légale pour détecter la présence de drogues et de toxines dans l'urine. Cette technique est particulièrement utile dans les cas d'intoxication ou d'abus de substances. La LC MS-MS permet d'identifier un large éventail de drogues, y compris les opioïdes, les stimulants, les sédatifs et les hallucinogènes.

Liquid chromatography–mass spectrometry (LC–MS) and AIMS methods combined with machine learning (ML) for in vitro diagnosis (IVD). (A) An automated approach coupled higher‐throughput LC‐MS metabolomics with a localized ML model for evaluating coverage of the plasma metabolome.⁸³ Copyright 2021, American Chemical Society. (B) A retention time model based on ML approaches for the assignment of lipid structures and automated annotation of lipidomics data

Avantages de l'analyse des neurotransmetteurs par LCMS-MS

L'analyse des neurotransmetteurs par LC MS-MS offre plusieurs avantages par rapport aux méthodes d'analyse traditionnelles :

  • Haute sensibilité et spécificité: Permet de détecter et de quantifier des concentrations plus faibles de neurotransmetteurs avec une plus grande précision, ce qui la rend plus fiable pour le diagnostic et le suivi thérapeutique.
  • Analyse simultanée: Permet de mesurer plusieurs neurotransmetteurs dans un seul échantillon d'urine, ce qui la rend plus efficace et rentable.
  • Capacité à analyser de petits volumes d'échantillon: Permet d'analyser de petits volumes d'urine, ce qui est particulièrement important pour les populations pédiatriques ou gériatriques.
  • Non invasive: L'analyse de l'urine est une procédure non invasive, ce qui la rend plus confortable pour les patients.

UPLC-MS/MS-based profiling of 31 neurochemicals in the mouse brain

Conclusion

L'analyse urinaire des neurotransmetteurs par LC MS-MS est une technique puissante et polyvalente qui offre de nombreux avantages pour la recherche en neurosciences, le diagnostic clinique, la médecine légale et d'autres domaines. Grâce à sa capacité à mesurer avec précision les concentrations de neurotransmetteurs, la LC MS-MS nous permet de mieux comprendre le fonctionnement du cerveau et de développer de nouveaux traitements pour les troubles neurologiques et psychiatriques.

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